明胶空心胶囊中铬的检测培训资料

——转自陕西省食品药品检验所

2012年5月

主要内容：

一、背景资料

二、检测方法

三、方法学验证

四、注意事项

一、   背景资料

2012年4月15日，央视《每周质量报告》栏目披露了国内部分医药生产企业使用皮革明胶制造胶囊，空心胶囊铬超标，在社会上反响巨大。

图表 1 明胶壳分类

明胶空心胶囊（Vacant Capsules）

系由胶囊用明胶加辅料制成的空心硬胶囊。由帽、体两节胶囊壳组成，可容纳各种药粉、液体、半固体和药片。可掩饰药物的异味，易于吞服，具良好的崩解能力，较长的保质期等优点。

规格尺寸：

从大到小依次为000#、00#、0#、1#、2#、3#、4#、5#等8种型号。

明胶药用空心胶囊的成分

主要原材料：

由明胶、甘油、水以及其它的药用材料（TiO₂）组成。明胶约占所有原辅料的90%以上。明胶是从动物（牛、马、猪、鱼、驴）的皮、骨、腱、鳞等含胶原蛋白的组织，经过酸、碱或酶水解处理以后降解生产的非均匀多肽混合物，由多种氨基酸所组成。

明胶成分：85～90%蛋白质，0.3%～0.2%矿物质，9%～12%水分。

外观近于无色或者呈淡黄色，为透明、无特殊臭味的固体，分子量为1.75-45万。

明胶的分类和行业标准

根据用途分为三类：药用明胶，食用明胶和工业明胶（照相明胶）。

有关标准

胶囊用明胶：《中国药典》2010年版（二部）（Cr：2.0mg/kg）

Gelatin：

EP7.0/BP2010（Cr：10ppm）

USP34（Cr没有规定）

JP16（Cr没有规定）

药用明胶：QB-2354-2005（Cr: ：2.0mg/kg）（QB:轻工行业标准）

食品添加剂明胶：GB 6783-94 （A级：1.0mg/kg，B级：2.0mg/kg）

食用明胶：QB/T 4087-2010 （Cr:2.0mg/kg）

工业明胶：QB/T 1995-2005 （Cr：没有规定）

二、检测方法

《中国药典》2010年版（二部）明胶空心胶囊项下铬检查项（P1204）

    取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5～10ml，混匀，浸泡过夜，盖上内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解。消解*后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至棕红色蒸汽挥尽并近干，用2%硝酸转移至50ml量瓶中，并用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；同时制备试剂空白溶液；另取铬单元素标准溶液，用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0µg的铬标准贮备液，临用时，分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0-80ng的对照品溶液。

取供试品溶液与对照溶液，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（附录IV D*法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。含铬不得过百万分之二（2mg/kg）。

检测方法-试验设备

仪器

原子吸收分光光度计（含石墨炉原子化装置）

电子天平

微波消解仪

电热板或其他赶酸设备，如：恒温消解仪、赶酸器等。

试剂

硝酸（优级纯，国药集团）

铬单元素标准溶液（1000µg/ml，国家标准物质）

检测方法-试验步骤

检验样品

胶囊剂（由明胶空心胶囊壳装载的胶囊）

检验项目

明胶空心胶囊中的铬

检验所需检品量的参考值

空心胶囊壳的制备

参考附录IE 胶囊剂装量差异项（附录8）

具体制备方法：倾出胶囊剂的内容物，胶囊壳用棉棒或小刷拭净（不得损坏囊壳），放置，待用。

胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬的测定方法

1.  铬标准贮备液的制备：

取铬单元素标准溶液（1000µg/ml），用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0µg的铬标准贮备液（不得超过一个月）。

2.  标准溶液的制备：

分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0-80ng的对照品溶液。临用时现配。

胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬测定方法（过夜）

1.  供试品溶液的制备：

精密称取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5～10ml，混匀，浸泡过夜，盖上内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解。消解*后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸汽挥尽并近干，用2%硝酸转移至50ml量瓶中，并加2%硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；同法制备试剂空白溶液，作为空白校正。

2.  测定法：

取供试品溶液与对照品溶液适量，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（《中国药典》2010年版（二部）附录IV D*法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。

胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬新测定方法（不过夜）

取样品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5～10ml，100℃30分钟使溶解，补加硝酸2ml，加水1ml，待冷却至室温，加0.5ml氢氟酸，进行*次消解（参考程序为10min升温至120℃，保持5min，10min升温至140℃，保持15min）。冷却放气（无需*打开消解罐盖，之需拧松即可）。随后进行第二次消解（参考程序为10min升温至150℃，保持5min，10min升温至185℃，保持15min）。冷却后，加热赶酸至1～2ml，2%硝酸溶液至50ml，作为供试品溶液。同法制备试剂空白溶液；另取铬单元素标准溶液，用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1µg的铬标准贮备液，临用时，分别精密取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0-80ng的对照品溶液。

测定法：

取供试品溶液与对照品溶液适量，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（《中国药典》2010年版（二部）附录IV D*法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。

三、方法学验证

线性：

制备含铬的对照品溶液至少5份，浓度依次递增，zui高浓度吸收值应在0.8以下，保证具有较好的线性范围，相关系数（r）≥0.99.检验波长：357.9nm。

准确性：

应进行整个实验过程的（包括前处理）方法学回收率验证，暂定回收率应为80%-120%的范围内。每次测定需进行随行回收试验。

重复性：

取限度浓度的标准品溶液重复测定5次，吸收度（测定值）的变化范围（RSD）不得过5%。

定量限（LOQ）：

本方法定量限应不低于0.5mg/kg。

四、注意事项

1.样品前处理是试验中的关键步骤，既要保证消解*，又要保证消解过程样品中的铬不损失，因此试验中建议加入10ml硝酸（优级纯），并需要浸泡过夜后一步消解/或不过夜二步消解。参考消解程序为：5min由室温升至120℃，维持3min；6min由120℃升至150℃，维持2min；6min由150℃升至180℃，维持20min。

注：国产微波消解的参考消解程序：120℃，维持2min；145℃，维持2min；160℃，维持2min。

2.为避免玻璃容器的干扰，试验中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材质）定容。

3.不同原子吸收仪试验参数可能不同，可根据原子吸收仪说明书中推荐程序设    定测定参数（参考石墨炉升温程序如下：5s升温至100℃，保持10s；5s升温至500℃，保持10s；0s升温至2100℃，保持3s；0s升温至2200℃，保持2s）

4. 含钛白 粉的胶囊壳（不透明胶囊）建议在微波消解时，样品中除加硝酸外可另加0.5ml氢氟酸，其他同供试品溶液制备，注意空白校正和方法学验证。

5. 实验用水：应采用纯化水，储藏水的容器宜用聚丙烯塑料材料制成，不宜选用玻璃容器长期储存。

6. 试剂应采用优级纯及以上级别试剂。

7. 试验中所用容器及器皿均需在每次使用前用盐酸溶液（浓盐酸：水/1:1）浸泡1h，再用硝酸溶液（浓硝酸：水/1:1）浸泡1h，再用纯化水冲洗干净后使用。微波消解容器应采用仪器清洗程序清洗，不得采用铬酸清洗液洗涤容器。

8.可供选择的铬元素标准溶液（1000µg/mL）由国家有色金属及电子材料分析测试中心提供；也可以由中国计量科学研究院提供。铬对照贮备溶液应密封，冷暗处保存。

9.结果判断：标准规定不得过百万分之二（2mg/kg）。由于微量测定，结果的偏差会较大，一般两份样品的相对偏差≤10%，取平均值即可（低浓度尤其明显）。

10.样品检测应严格遵守《中国药典》2010年版（二部）“明胶空心胶囊”铬项下方法试验，如因试验需要改变样品前处理方法及检测波长，应按照实验室有关质量管理程序（偏离）进行。

11.若试剂空白溶液测定值过高（宜不超过标准曲线zui低浓度点吸光度值的50%），应换用空白干扰小的溶液重新试验。

12.注意试验所需的所有仪器均应在计量检定合格效期内。

13.若供试品溶液浓度过高，可稀释到标准曲线范围内进行测定。

14.由于硬、软胶囊壳中含有不同比例的甘油（软胶囊比例较高，甘油：明胶比例可达1:2），在进行微波消解时，甘油可与硝酸产生反应，容易爆罐，请注意消解时的安全监控，尽量在前处理时预消解。